पशु चिकित्सा विज्ञान एवं चिकित्सा निदान जर्नल

वायरल संक्रमण के निदान में रिकॉम्बिनेंट हिस्टिडीन-टैग्ड एंटीजन का अनुप्रयोग

मोहम्मद एम हुसैन और रेमंड आर रोलैंड

हिस्टिडीन-टैग किए गए प्रोटीन अक्सर एंटीबॉडी के साथ पाए जाते हैं हिस्टिडीन-टैग किए गए प्रोटीन अक्सर हिस्टिडीन टैग के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ पाए जाते हैं; ये प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययनों में उपयोगी होते हैं। एक पेंटा-हिस मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (mAb) का उपयोग फ्लोरोसेंट माइक्रोस्फीयर इम्यूनोसे (FMIA) में सेट किए गए प्रत्येक माइक्रोस्फीयर बीड से जुड़े पुनः संयोजक प्रोटीन की सापेक्ष मात्रा का अनुमान लगाने के लिए किया गया था। इस अध्ययन में, सात अलग-अलग पशु वायरस से पुनः संयोजक एंटीजन का पता लगाने के लिए एंटी-हिस mAb का उपयोग: पोर्सिन प्रजनन और श्वसन सिंड्रोम वायरस (PRRSV), पोर्सिन सर्कोवायरस टाइप 2 (PCV2), स्वाइन इन्फ्लूएंजा वायरस (SIV), अफ्रीकी स्वाइन फीवर वायरस (ASFV), क्लासिकल स्वाइन फीवर वायरस (CSFV), बोवाइन वायरल डायरिया वायरस (BVDV), और रिफ्ट वैली फीवर वायरस (RVFV) युग्मन के बाद माइक्रोस्फीयर बीड्स से बंधे हुए थे। प्रोटीन 6xHis-ubiquitin संलयन प्रोटीन के रूप में उत्पादित किए गए थे और ल्यूमिनेक्स मैगप्लेक्स® पॉलीस्टाइनिन, कार्बोक्सिलेटेड माइक्रोस्फीयर बीड्स से सहसंयोजक रूप से युग्मित किए गए थे। लक्ष्य प्रतिजनों को एक एकल मल्टीप्लेक्स में इकट्ठा किया गया और एंटी हिस-टैग mAb की उपस्थिति में परीक्षण किया गया। परिणाम औसत फ्लोरोसेंट तीव्रता (MFI) के रूप में रिपोर्ट किए गए थे। His-टैग किए गए पुनः संयोजक प्रतिजनों और एंटी-His टैग mAb के बीच की अंतःक्रिया का परीक्षण His-टैग अवरोधक पेप्टाइड का उपयोग करके किया गया था। His-टैग अवरोधक परख के परिणामों से पता चला कि His-टैग अवरोधक पेप्टाइड का 1 μg/ml His-टैग किए गए प्रतिजनों और एंटी-HismAb की अंतःक्रिया को पूरी तरह से बाधित कर सकता है। नकारात्मक सीरम नमूनों के लिए MFI मानों ने PRRSV-N, PCV2, SIV, ASFV, CSFV और BVDV सकारात्मक सीरम की तुलना में 10-40 गुना कमी दिखाई। इसलिए, एंटी-हिस mAb का उपयोग मोतियों से प्रतिजन बंधन का आकलन करने के लिए एक सुविधाजनक साधन प्रदान करता है।